熒光蛋白觀察用、油浸物鏡適用封片劑

熒光蛋白觀察用、油浸物鏡適用封片劑

Super Clear Mount封片劑

Super Clear Mount（RI:1.52）是將折射率（RI）調(diào)整到與浸油（RI:1.52）以及蓋玻片（RI:1.52）折射率wan全一致的產(chǎn)品。與傳統(tǒng)封片劑相比，Super Clear Mount提高了深層部位的分辨率，可用于更高分辨率的分析。另外，用油鏡觀察時(shí)，即使在深部也可以維持穩(wěn)定的亮度與分辨率（尤其是z分辨率），也可用于超分辨率的應(yīng)用。

數(shù)據(jù)來源：國(guó)立研究開發(fā)法人理化學(xué)研究所 柯孟岑老師、今井猛老師（現(xiàn)九州大學(xué)醫(yī)學(xué)研究院）

◆原理/性能表

圖1. Super Clear Mount原理

*Super Clear Mount雖為非硬化性，但與空氣接觸部分會(huì)硬化。因此，可以通過滴入過量的Super Clear Mount，用多余部分硬化蓋玻片、樣本和載玻片。

**與其他市售品比較，+++：好。

◆特點(diǎn)（深層部位的高分辨率、高明亮度）

圖2. 使用Super Clear Mount的深部高分辨率、高明亮度數(shù)據(jù)

（A）使用共聚焦顯微鏡（pinhole size，1 AU）與油浸物鏡（100 ×：NA 1.40；WD 0.13 mm）進(jìn)行熒光微球(diameter, 100 nm)PSF分析。

（B）lateral 以及 axial　FWHM（分辨率）數(shù)據(jù)

（A）深層部位可維持高分辨率。

（C）使用羅丹明色素的共聚焦axial scans數(shù)據(jù)

（A）深層部位可維持高分辨率。

◆防止熒光蛋白褪色的效果

在廣泛的頻譜范圍內(nèi)發(fā)揮保持信號(hào)與防褪色效果

圖3. 使用Super Clear Mount的熒光蛋白防褪色效果數(shù)據(jù)

（A）熒光蛋白EGFP光褪色曲線圖

（A）HEK293細(xì)胞中的熒光蛋白表達(dá)后，分別使用Super Clear Mount、PBS、其他公司商品（熒光蛋白適用）封片。

（A）持續(xù)使用水銀燈照射并檢測(cè)熒光亮度變化。物鏡為20× dry（NA 0.4）。將照射開始時(shí)的熒光亮度設(shè)為1。

（B）各熒光蛋白熒光亮度的穩(wěn)定性。

◆使用超分辨率顯微鏡的應(yīng)用實(shí)例

使用超分辨率顯微鏡，實(shí)現(xiàn)深部超分辨率成像

圖4. 使用Super Clear Mount，并用超分辨率顯微鏡觀察

傳統(tǒng)的封片劑會(huì)使畫面失真，但使用Super Clear Mount能在深部獲得高分辨率圖像。

（A）使用超分辨率顯微鏡觀察細(xì)胞膜上的絲狀偽足延伸在HEK293T細(xì)胞的細(xì)胞膜上表達(dá)EGFP后，使用核染料、線粒體染料進(jìn)行觀察通過超分辨顯微鏡獲取細(xì)胞膜上的絲狀偽足延伸。

（B）使用超分辨率顯微鏡觀察果蠅大腦

（A）果蠅大腦延髓神經(jīng)節(jié)的神經(jīng)細(xì)胞：使用熒光蛋白（GFP）標(biāo)記Mi1，使用超分辨率觀察（深度約為100 μm）。

（A）實(shí)現(xiàn)深層部分超分辨率成像。