簡要描述：StemSure® hPSC 凍存液，AF 是無動物源成分的人 iPS 細(xì)胞用凍存液。本品含 DMSO。
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產(chǎn)品分類
| 品牌 | 其他品牌 | 供貨周期 | 一個月 |
|---|
用于人iPS細(xì)胞凍存
StemSure® hPSC 凍存液，AF
StemSure® hPSC 凍存液，AF 是無動物源成分的人 iPS 細(xì)胞用凍存液。本品含 DMSO。
◆特點
● 能以高細(xì)胞存活率凍存人 iPS 細(xì)胞
● 不含動物源成分
● 可以以緩慢凍結(jié)的方式進行凍存
● 可用于無飼養(yǎng)層培養(yǎng)的細(xì)胞
● 無需進行繁雜的試劑配制
● 無需程序降溫
◆人 iPS 細(xì)胞凍存步驟
冷 凍 | 1. 在除去人 iPS 細(xì)胞培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)液，用 D-PBS（-）清洗后，用 Accutase 等分散細(xì)胞。 |
2. 添加含有 10 µmol/L Y-27632 的人 iPS 細(xì)胞用培養(yǎng)基（hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi）），用移液器吹散成單細(xì)胞。 | |
3. 將吹打分散后的細(xì)胞懸浮液移至樣本管中，離心（1,000 rpm，３分鐘，室溫）后，除去上清液。 | |
4. 添加 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi），用移液器懸浮。 | |
5. 計算細(xì)胞數(shù)，將樣本管離心（1,000 rpm，３分鐘，室溫）后，除去上清液。 | |
6. 利用本產(chǎn)品使細(xì)胞懸浮成 2×106 cells/mL，并以 500 µL/管進行分裝。 | |
7. 在 -80°C 下冷凍后，在 -150°C 或者 -80°C 的條件下保存（長期保存建議保存在 -150°C）。 | |
復(fù) 蘇 | 1. 添加 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi）到凍存瓶中，復(fù)蘇冷凍細(xì)胞。 |
2. 離心（室溫下，1,000 rpm，３分鐘）后，除去上清液，添加 hPSC 培養(yǎng)基（+ROCKi），使細(xì)胞懸浮。 | |
3. 計算細(xì)胞數(shù)，以 2×105 cells/6 cm |
◆人iPS細(xì)胞201B7株的凍存
確認(rèn)細(xì)胞存活率和細(xì)胞增殖率
將培養(yǎng)中的人 iPS 細(xì)胞 201B7 株分散成單細(xì)胞后，重懸于 StemSure® hPSC 凍存液，AF 中，在 -80°C下凍存２~４天。
確認(rèn)冷凍復(fù)蘇后的細(xì)胞存活率和細(xì)胞增殖率。反復(fù)冷凍復(fù)蘇５次后，確認(rèn)細(xì)胞、細(xì)胞集落的形態(tài)和各種未分化標(biāo)記（Oct3/4、Nanog、BC2LCN）的表達。
確認(rèn)細(xì)胞集落的形態(tài)
確認(rèn)細(xì)胞存活率和細(xì)胞增殖率
結(jié)果表明，用 StemSure® hPSC 凍存液，AF 凍存的人 iPS 細(xì)胞顯示出高細(xì)胞存活率和細(xì)胞增殖率。
另外還確認(rèn)了各種未分化標(biāo)記的表達。
◆人iPS細(xì)胞凍存步驟
使用用 StemSure® hPSC 凍存液，AF 冷凍復(fù)蘇５次后的 iPS 細(xì)胞 201B7 株，形成胚葉體，βⅢ-Tubulin,α-SMA,AFP 的表達確認(rèn)其分化成了三胚葉。
（胚葉體形成，三胚葉分化誘導(dǎo)時的培養(yǎng)基組成）
Stemsure D-MEM+SSR+2mol/L L-Glutamine+10mmol/L2-Mercaptoethanol +1×Non-essential Amino Acids Solution
測試項目：外觀，應(yīng)用試驗（iPS 細(xì)胞 201B7株），無菌試驗，內(nèi)毒素，支原體測試
可用于ES干細(xì)胞的凍存液，請點擊：StemSure細(xì)胞凍存液
通用動物細(xì)胞凍存液，請點擊：CultureSure無血清細(xì)胞凍存液
| 產(chǎn)品編號 | 產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品等級 | 備注 |
| 197-17831 | StemSure® hPSC Freezing Medium, AF StemSure® hPSC凍存液，AF | 100 mL | 細(xì)胞培養(yǎng)用 |
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